发布日期：2025-01-03 18:08    点击次数：101

作者：范大鹏，岳永宁，李浩，商学钗，李奂谕，肖荣，蔡龙第一作者及单位：范大鹏，岳永宁，浙江大学医学院附属杭州胸科医院临床检验实验中心通信作者及单位：蔡龙，浙江大学医学院附属杭州胸科医院临床检验实验中心Evaluation of the performances of InnowaveDx MTB-RIF assay in the diagnosis of pulmonary tuberculosis using bronchoalveolar lavage fluidTuberculosis (Edinb). 2023 May 2;140:102349doi: 10.1016/j.tube.2023.102349PMID: 37187053背景结核病是一种传染病，2020年全球估计有1000万例罹患结核病。世界卫生组织2014年提出了2035年“终止结核病战略”的目标。然而，《2021年全球结核病报告》显示，2015年至2020年期间，结核病发病率仅下降了11%，主要的制约因素是结核病的诊断不足，到2020年只有59%的肺结核(PTB)病例经病原学诊断，这导致治结核病疗延误，死亡率和发病率增加。传统的结核分枝杆菌检测方法包括痰涂片镜检和结核分枝杆菌培养。前者敏感性低，后者耗时、费力且技术要求高。二者都不能满足临床快速准确诊断结核病的需求。近年来，分子诊断技术呈快速发展的趋势，可快速、直接地检测临床标本中结核分枝杆菌(MTB)。Xpert MTB/RIF检测(Xpert)(美国Cepheid)于2010年获得世界卫生组织(WHO)批准，可在2小时内自动检测结核分枝杆菌(MTB)和利福平(RIF)耐药性。越来越多的证据表明，Xpert具有较高的诊断准确性。然而，高成本和低通量阻碍了其在临床中的应用，特别是在欠发达国家。CapitalBio分枝杆菌核酸检测（PCR-荧光探针法）采用实时荧光PCR和TaqMan探针技术检测结核分枝杆菌(MTB)和非结核分枝杆菌(NTM)，然而不能同时检测RIF耐药性。实时荧光核酸等温扩增检测（SAT)是一种基于RNA的检测技术，样本处理不当容易导致RNA降解和假阴性结果，这限制了该技术的敏感度。因此，现迫切需要开发一种敏感度高和成本低的新型结核分子诊断工具，以在资源有限的条件下控制结核病和耐药结核病的传播。InnowaveDx MTB-RIF检测是一种自动化的分子诊断系统，可在不到3小时内同时检测结核分枝杆菌符合群和RIF耐药性。它基于RT-PCR (荧光探针法)，以IS6110为靶标检测结核分枝杆菌复合体的核酸，并以rpoB基因为靶标检测利福平的耐药突变。此外，InnowaveDx MTB-RIF检测具有更高的检测通量，可满足临床不同数量检测样本的需求。痰涂片阴性结核或痰少患者的肺结核诊断困难。支气管镜检查可直接在患者病变部位获得可靠标本，对肺结核诊断具有重要价值。在本研究中，对来自213例患者的支气管肺泡灌洗液样本（BALF）行Innowavedx MTB-RIF检测，对其诊断肺结核的准确性进行了评估。方法1. 研究设计及患者诊断分类：收集2021年9月至2021年12月来自浙江大学医学院附属杭州胸科医院疑似PTB患者的213 份 BALF 样本。进行AFB 涂片、结核分枝杆菌培养、Xpert、InnowaveDx、CapitalBio和SAT检测。并通过浙江大学附属杭州胸科医院的医疗系统登记患者临床资料、影像学、组织病理学、微生物学特征和随访数据。根据相关指南进行肺结核诊断分类。2.支气管镜标本采集和实验检查：Olympus电子支气管镜收集灌洗液15-20ml，一部分样本用于临床诊疗，剩余的8ml BALF样本均分用于进行本研究的评价实验：MGIT960分枝杆菌培养、抗酸涂片染色、Xpert MTB/RIF、 CapitalBio试验、SAT和InnowaveDx MTB-RIF检测。3.数据处理和统计分析：临床特征和人口统计学数据的统计使用SPSS 20.0。连续数值变量使用非参数检验，组成比使用方检验。以临床诊断为参考，通过网站计算敏感度(SE)、特异度(SP)、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)和ROC曲线下面积(AUC)。InnowaveDx检验与Xpert检验在RIF敏感性检测的一致性评价采用未加权Kappa分析。P＜0.05认为结果有统计学意义。结果1. 患者特征：本研究纳入患者共有213例，其中163例(76.5%)确诊为PTB(细菌学确诊结核患者106例，临床诊断结核患者57例)，其余50例(23.5%)为非结核患者（包括5例肺癌患者，24例其他感染性疾病患者，NTM患者21例）。在21例NTM患者中，培养阳性16例，涂片阳性6例。所有入组患者均为HIV阴性。2. 以临床诊断为参考，评估AFB涂片、培养、Xpert、InnowaveDx、CapitalBio和SAT的诊断性能：检测敏感度从高到低依次为：InnowaveDx为70.6% (95%CI: 62.8%～77.3%)、Xpert为57.7% (95%CI: 49.7%～65.3%)、 CapitalBio为50.9% (95%CI: 43.0%～58.8%)、培养为49.1% (95%CI: 41.2%～57.0%)、SAT检测为44.2% (95%CI: 36.5%～52.1%)、AFB涂片为22.1% (95%CI: 16.1%～29.4%)。特异度从高到低依次为：Xpert为100% (95%CI:91.1%～100%)、 CapitalBio为100% (95%CI: 91.1%～100%)、SAT为100% (95%CI:91.1%～100%)、InnowaveDx为90.0% (95%CI: 77.4%～ 96.3%)、AFB涂片为88.0% (95%CI: 77.5%～ 95.1%)、培养为68.0% (95%CI: 53.2%～ 80.1%)。InnowaveDx试验与其他试验的特异度无显著性差异(P＞0.05)。ROC曲线分析显示，InnowaveDx检测的曲线下面积(AUC)为0.803 (P ＜0.001)，对TB的诊断效果较好。3. AFB涂片、培养、Xpert、InnowaveDx、CapitalBio和SAT的结核检出率不同：对于106例确诊结核病病例(患者在至少一种试验检出结核分枝杆菌，不包括InnowaveDx试验)，InnowaveDx试验能够在92.5%(98/106)的病例中检测出结核分枝杆菌阳性，这与Xpert的结果(88.7%，94/106)类似(P=0.347)。在57例临床诊断结核病患者中，InnowaveDx检测能够检出17例(29.8%)。InnowaveDx对培养阳性和阴性患者的检出率分别为96.3%(77/80)和45.8%(38/83)。InnowaveDx法在培养阳性病例中的检出率与Xpert法相当(χ2 = 15.728, P = 0.375)；而在83例培养阴性的患者中，与AFB涂片、Xpert、CapitalBio和SAT相比，InnowaveDx结核检出率最高(45.8%比1.2%、24.1%、12.0%和12.0%;P＜0.001， χ2 = 1.199;P ＜0.001，χ2 = 12.326;P＜0.001， χ2 = 5.363;P＜0.001， χ2 = 5.363)。4. InnowaveDx对利福平耐药检测性能的评估：InnowaveDx诊断利福平耐药的敏感度为84.6% (95%CI:53.7%～ 97.3%),特异度为96.1% (95% CI: 88.1%～ 99.0%)。比较InnowaveDx与Xpert检测利福平耐药的一致性，Kappa值为0.78。在评估的89例患者中，5例患者的InnowaveDx和Xpert利福平药敏结果不一致，对不一致的结果进行分析，2例具有极低细菌载量，2例具有低细菌载量，1例具有高细菌载量。结论基于InnowaveDx MTB-RIF检测的特点，笔者建议它可以作为诊断PTB的初筛工具。该方法具有敏感度高、检测周期短、成本低、通量大等优点，可用于中低收入国家结核病流行病学调查和结核病患者初筛。此外，低结核分枝杆菌载量可能对利福平耐药的结果有影响，在解释InnowaveDx对低结核分枝杆菌样本中RIF的敏感性时应谨慎。注：除非特别声明，本公众号刊登的所有文章不代表《中国防痨杂志》期刊社的观点供稿：范大鹏编辑：于   菲  审校：范永德发布日期：2023-05-30